什么是氣溶膠污染？

做PCR檢測被核酸污染所困擾?假陽性讓你焦頭爛額?

環境中的氣溶膠污染是造成PCR結果假陽性最常見的因素。想最大程度降低PCR實驗污染概率,確保檢測結果的準確性,我們首先來認識認識這其中的罪魁禍首——氣溶膠

什么是氣溶膠？

概念：氣溶膠是指懸浮在氣體介質中的固態或液態顆粒所組成的氣態分散系統。

說人話版本：氣溶膠是固體或液體懸浮在空氣中的微米級顆粒，空氣和顆粒像膠水一樣難舍難分。用水浸泡手機，不管泡多久手機都不會化到水里（會壞不要學），往水里加點鹽，鹽會溶解，變成液體的一部分。而介于二者之間的，就是膠體。如墨水，其顏料顆粒不會溶解到水中，又因為尺寸較小、可以比較穩定地懸浮在水里。像云、霧、煙等這些都是天然的氣溶膠。如果一種物質顆粒尺寸較小、可以較為穩定地在空氣中懸浮，就可以形成氣溶膠，所以氣溶膠幾乎無處不在。

電梯里有人吸煙后，哪怕過了半個小時進入還能聞到煙味，這正是因為煙霧形成了氣溶膠在空氣中漂浮，在通風不良的封閉空間里氣溶膠能存在非常久，病原體也會以這種方式存在。換句話說，如果一個通風不良的封閉空間里面有病原體，往往會存在非常長時間，這種帶病原體的氣溶膠被稱為：生物-氣溶膠。

核酸檢測靈敏度高、特異性強，在操作過程中容易受到污染，導致結果假陽性，而氣溶膠幾乎無處不在，在通風不良的封閉空間會存在非常久，所以PCR檢測最常見且最難消除的污染就是氣溶膠污染。

如何減少PCR產物污染？

氣溶膠污染主要發生在PCR產物分析階段，因為PCR產物拷貝數大( 指數增長) ，所以極微量的氣溶膠可能就會造成假陽性。

1、合理的管理和操作,能降低污染的可能性，從而減少污染。例如做好實驗室日常清潔，戴手套等全身防護，使用帶濾芯的槍頭，按實驗指南操作等等。

2、因為在空氣與液體面摩擦時會形成氣溶膠，比如劇烈地搖動反應管，開蓋吸樣，還有反復吸樣等都可形成氣溶膠污染，因此減少開蓋對防氣溶膠污染至關重要。

3、利用UDG酶選擇性水解含dU的DNA單鏈或DNA雙鏈的機制，巧妙地引入dUTP取代PCR體系中的dTTP而構成dUTP/UDG酶防污染系統。穩定使用該系統，可有效消除PCR體系中混入的擴增殘留污染物（多以氣溶膠形式存在），保證擴增結果的準確性。

產品介紹

方舟實時熒光定量PCR儀采用實時熒光探針法，一次提取，一管式試劑，一步加樣， 一步掃碼，即可進行檢測，直接顯示結果。 

產品特點：

1.操作簡單，精準高效，自動判讀，單人可操作，檢查結果機器自動判讀，減少人為干擾，簡單精準。

2.操作簡便，方便使用；反應過程無需開蓋，有效減少氣溶膠污染。

3.dUTP/UDG酶防污染系統，有效減少假陽性；加入UDG酶，dUTP取代PCR體系中的dTTP，有效減少假陽性。

懷疑發生污染怎么辦？

1、監測發現污染并及時處理

如果對結果有疑惑，可以在實驗過程中添加陰性對照、無模板對照等陰性質控品來檢驗體系中的污染，以確保對污染的及時發現。例如加入無菌水做空白對照，與樣品一起加入機器，來判斷是否有氣溶膠污染，早發現早解決。

2、紫外燈照射

實驗結束后打開紫外燈進行紫外消毒，照射時間≥1h能有效滅殺空間內的生物-氣溶膠。其原理為：在254nm紫外誘導下DNA鏈上相鄰的嘧啶發生交聯，嘧啶二聚體無法被切除 ，DNA聚合酶被阻礙或者DNA不能被完全變性，使合成反應終止。但該方法只對500bp以上的片段有效，對短片段效果不大。

3、次氯酸鈉

次氯酸鈉具有氧化損傷核酸的作用，可以將留在實驗室的擴增產物破壞掉。先用75%酒精對實驗室空氣進行密集噴淋，能讓實驗過程中生成的氣溶膠產生較好的沉降效果。噴淋結束立即用次氯酸鈉擦拭工作臺面/拖擦地面，作用10min后再用清水擦拭工作臺面，并保持通風。

實驗室核酸檢測防治污染包括但不限于以上這些措施，實際真的發生污染是很難根除的，防遠大于治，為了避免由于氣溶膠污染造成的假陽性等現象，保障檢測結果的準確性，檢測人員必須嚴格遵守操作規程，把"防污染”貫穿于整個實驗過程中。

養殖行業

隨著我國養殖業的不斷發展，由傳染病所造成的危害日愈突出。各種病毒與細菌以及寄生蟲病混合感染或繼發感染，病毒的變異以及細菌耐藥性的產生，是目前動物疫病難防難控的主要原因。我國淡水養殖產量在逐年提升，然而日趨嚴重的病害問題不僅給水產養殖者造成巨大的經濟損失，而且嚴重威脅水環境安全、水產品質量以及人類安全?；诖?，對各種病原體的準確診斷，尤其是早期、快速診斷尤為重要。

寵物行業

隨著人們生活水平的提高，寵物的養殖量大大增加，寵物傳播的傳染病也越來越引起人們的重視。比如弓形蟲、鉤端螺旋體、狂犬病等，都給人們的生命和健康造成很大的危害和威脅。為了預防和控制這類傳染病的發生，除了疫苗免疫預防之外，早期診斷也是很有力的手段。

方舟實時熒光PCR儀

方舟實時熒光定量PCR儀采用實時熒光探針法，設計特異的靶標序列及熒光探針，PCR每擴增一條DNA分子，釋放一個熒光信號，可以在循環過程中任一點檢測熒光，實現了熒光信號的累積與PCR產物的形成同步，不僅實現了對靶基因的準確定量，同時很大程度上提高了擴增特異性，縮短了檢測時間。實時熒光PCR檢測技術可對動物發病病因及其身上攜帶的病原體進行快速、高效的診斷，從而為臨床用藥、疫苗免疫預防提供準確指導，有力的提高了動物疫病防疫能力?？傊?PCR技術在動物疫病研究和診斷方面,已成為非常實用的工具,PCR技術無疑將廣泛地應用于獸醫學領域，包括診斷病原、基因表達、遺傳病檢測、腫瘤細胞監測等方面。